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抗胰島素抗體（Insulin Ab）ELISA檢測試劑盒

1 介紹和預(yù)期用途

胰島素依賴型糖尿病(IDDM)或 1 型糖尿病是一種使人衰弱的慢性疾病，它損害關(guān)鍵激素胰島素的產(chǎn)生和分泌，并改變血糖代謝。胰島素由胰島細(xì)胞或朗格漢斯胰島合成和分泌(1)。胰島素合成的破壞是由 IDDM 患者自身抗體對胰島細(xì)胞的免疫破壞引起的(2-4)。這種異常(自身免疫)可能是遺傳的和/或由暴露于有毒化學(xué)物質(zhì)、病毒感染和各種形式的應(yīng)激引起(5)。

IDDM 有一個特征性的無癥狀的糖尿病前期階段，可能持續(xù)數(shù)年。在此期間，患者對靜脈/口服葡萄糖負(fù)荷的反應(yīng)表 現(xiàn)出早期胰島素釋放的減少。在大多數(shù)情況下，這些個體攜帶循環(huán)胰島細(xì)胞自身抗體(ICA)和/或胰島素自身抗體

(IAA) 。ICA 可早在 IDDM 臨床發(fā)病前 8 年檢測到(6)，因此可作為該病或易患該病的早期指標(biāo)。 ica 陽性的個體可能 表現(xiàn)為胰島細(xì)胞功能的進(jìn)行性喪失， 表現(xiàn)為早期胰島素釋放的中斷。當(dāng)這種早期相胰島素釋放停止時，臨床顯性IDDM 就發(fā)生了(6)。

70%新近發(fā)病的 IDDM 患者存在胰島細(xì)胞自身抗體(13,14)，而對照組非糖尿病人群只有 0.1 - 0.5%(11,15) 。IDDM 患者的 一級親屬中也檢測到 ICA。這些人是 IDDM 的高危人群。一些研究報(bào)道，IDDM 患者的ica 陽性一級親屬隨后發(fā)展為糖  尿病(16-19) 。其他研究也表明，血清 ICA 和 IAA 的存在是發(fā)生 IDDM 可能性增加的一個指標(biāo)(3,6-12)。因此，血清學(xué)檢 測 ICA 可能是早期診斷 IDDM 的有力工具。這些自身抗體作為 IDDM 標(biāo)記物的意義也體現(xiàn)在最終發(fā)展為IDDM 的非糖尿病個體中。Riley 等人最近報(bào)道，檢測2 型糖尿病患者的ICA 可以在臨床癥狀出現(xiàn)之前識別出 IDDM，并預(yù)測是否需要胰島素治療(20)。因此，那些最初診斷為2 型糖尿病并攜帶血清ICA 的患者可能惡化為胰島素依賴。

早期發(fā)現(xiàn)循環(huán) ICA 對于確定一般人群中的個體、IDDM 患者的兄弟姐妹和家庭非常重要， 因?yàn)樗麄冇刑悄虿〉倪z傳易感 性，所以他們患這種疾病的風(fēng)險(xiǎn)更高。在一個關(guān)于 ICA 的國際研討會上，人們強(qiáng)調(diào)迫切需要 ELISA 來測定胰島細(xì)胞自身 免疫(21)。

目前，血清 ICA 是通過間接免疫熒光和組織化學(xué)方法測定的，采用冷凍的未固定的人/靈長類動物或嚙齒動物胰腺切片 作為底物。盡管自 1974 年它的最初描述以來(22,23)，人們進(jìn)行了各種嘗試來改進(jìn)和修改這一程序，但間接免疫熒光/組 織化學(xué)技術(shù)仍然存在固有的方法學(xué)問題。該技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化已被證明是非常困難的。這種 “冷凍切片 "技術(shù)的可靠性受  到一些因素的限制，例如不同胰腺的差異、不可避免地需要不固定的胰腺組織以及不太容易獲得合適的組織。

DRG ' s ICA胰島細(xì)胞自身抗體檢測試劑盒是一種ELISA試劑盒，是一種用于體外檢測針對胰島細(xì)胞抗原的循環(huán) IgG 抗體的定性ELISA 檢測。

2 .試驗(yàn)原理

將純化的胰腺抗原混合物固定在微孔上。在孵育期間，血清樣本中的抗體在室溫下與微孔上的抗原分子反應(yīng)。洗掉多 余的/未結(jié)合的血清材料后，將酶(堿性磷酸酶)標(biāo)記的山羊抗體(針對人 IgG)添加到抗原-抗體復(fù)合物中。在再次洗滌后，添加底物(PNPP)，并通過分光光度法測定產(chǎn)生的顏色。顏色的強(qiáng)度與樣品中 ICA 的濃度成正比。ica 陽性對照 作為內(nèi)部質(zhì)量控制，確保有效結(jié)果。

3 警告和注意事項(xiàng)

隨試劑盒提供的所有試劑僅用于體外診斷。

1.潛在的生物有害物質(zhì)

校準(zhǔn)物和控制物的矩陣是人血清。使用 FDA 許可的試劑檢測時發(fā)現(xiàn)，所用人血清對 HbsAg、抗- hiv 1/2 和抗- hcv 無 反應(yīng)。由于沒有任何檢測方法可以保證不存在 HIV、乙型肝炎病毒或其他傳染性病原體， 因此應(yīng)將這些試劑當(dāng)  作潛在傳染性進(jìn)行處理。

2.  疊氮化物鈉

有些試劑含有疊氮鈉作為防腐劑。疊氮化物鈉可能與鉛、銅或黃銅反應(yīng)形成爆炸性的金屬疊氮化物。在處理這些材 料時，一定要用大量的水沖洗， 以防止疊氮化物堆積。

3.       停止解決方案

停止液由 1N NaOH 組成。這是一種強(qiáng)堿，應(yīng)謹(jǐn)慎使用。 它會導(dǎo)致燒傷，應(yīng)該戴上手套。戴上護(hù)眼裝置和適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服。 避免吸入。用水稀釋，然后用紙巾吸收。

4.底物溶液

底物溶液由對硝基苯磷酸鹽(PNPP)組成，這是一種用于本 ELISA 試驗(yàn)的非蛋白顯色底物。有時底物可顯示淡黃色。 這種顏色不會影響測試結(jié)果。

預(yù)防措施

1.不要冷凍檢測試劑，將所有試劑盒組件始終保存在 2 °C - 8 °C。 2.每次檢測時必須進(jìn)行陽性和陰性對照。

3.只使用透明血清作為檢測標(biāo)本。檢測樣本不應(yīng)有肉眼渾濁、溶血或微生物污染。 4.所有樣品應(yīng)一式兩份分析。

5.不要混合不同批次的試劑。 6.不要使用過期的試劑。

7.不允許試劑在室溫下長時間放置。 8.不要讓基材溶液暴露在光下。

9.仔細(xì)的移液技術(shù)對可重復(fù)性和準(zhǔn)確的結(jié)果是必要的。

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