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                                               基孔肯雅熱IgM檢測試劑盒

                                                     （酶聯(lián)免疫法）


產(chǎn)品詳細(xì)

預(yù)期用途
基孔肯雅熱IgM檢測試劑盒能用于人血清和血漿（檸檬酸鹽）中基孔肯雅熱IgM抗體的定性檢測。

檢測原理
此試劑盒采用酶聯(lián)免疫法。微孔中預(yù)包被有抗人IgM，用于結(jié)合樣品中相應(yīng)的抗體。洗板后，去除非結(jié)合的樣品。再加入基孔肯雅熱抗原液，再次洗板后，再加入生物素化的基孔肯雅熱抗體。加入鏈霉親和素標(biāo)記結(jié)合物（酶聯(lián)物），與固相的特異性的基孔肯雅熱復(fù)合物結(jié)合。加入TMB底物液后，微孔中顯藍(lán)色。顯色的強度與病人樣品中基孔肯雅熱IgM抗體的量成正比。加入終止液終止酶反應(yīng)，形成黃色終點產(chǎn)物。后在酶標(biāo)儀處450 nm讀數(shù)。

組成成分
1.微孔板——12×8——包被有抗人IgM
2.樣品稀釋液——1×100 mL——即用型、pH7.2±0.2、黃色、白蓋
3.洗滌液——1×50ml——20倍濃縮、pH7.2±0.2、白蓋
4.基孔肯雅熱抗原液——6瓶——凍干品、紅蓋
5.基孔肯雅熱抗體液——1×6ml——含生物素化基孔肯雅熱抗體、即用型、藍(lán)色、白蓋
6.鏈霉親和素酶聯(lián)物——1×6ml——含鏈霉親和素標(biāo)記的HRP、即用型、紅色、黑蓋
7.終止液——1×15ml——即用型、含硫酸、濃度0.2mol/L、紅蓋
8.底物液——1×15ml——即用型、黃蓋
9.陽性質(zhì)控——1×1.5ml——即用型、黃色、紅蓋
10.臨界質(zhì)控——1×2ml——即用型、黃色、綠蓋
11.陰性質(zhì)控——1×1.5ml——即用型、黃色、藍(lán)蓋

檢測所需材料（試劑盒內(nèi)未提供）
■酶標(biāo)儀（450/620 nm）
■恒溫箱（37 ℃）
■洗瓶或自動洗板機
■移液管（規(guī)格10和1000 µL）
■震蕩器
■去離子水或蒸餾水
■一次性試管
■計時器


儲存條件
基孔肯雅熱試劑盒儲存于2~8℃，能穩(wěn)定保存至有效期，有效期見標(biāo)簽 。

檢測步驟
試驗前，仔細(xì)閱讀說明書。嚴(yán)格執(zhí)行說明書要求才能得到蕞優(yōu)結(jié)果。如試驗使用自動洗板機，建議每孔350µL，洗板5次（如手工洗，則每孔300µL，洗板3次）。試驗前，確定好樣品，質(zhì)控品的加樣布局方案。取所需板條置于板架上。
至少設(shè)
1孔（如A1）        空白對照
1孔 (如B1)         陰性質(zhì)控
2孔 (如C1+D1）     臨界質(zhì)控
1孔（如E1）        陽性質(zhì)控
如覺得有必要，建議樣品和質(zhì)控品都作雙份檢測。
試驗應(yīng)按同樣的加樣順序加取試劑，避免不同的時間間隔造成誤差。
使用新的一次性加樣槍頭，加各質(zhì)控品、樣品
調(diào)節(jié)恒溫箱為37±1℃
1.加50µL質(zhì)控品和稀釋樣品至相應(yīng)各孔中，設(shè)A1作為空白對照
2.封板紙蓋板
3.37 ± 1 °C溫育1小時±5分鐘
4.溫育后，移除封板紙，倒出微孔內(nèi)液體，每孔用300µL稀釋洗滌液，洗板3次，避免洗滌液相互溢濺至其它微孔。每次洗板時，浸泡時間應(yīng)大于5秒。后，在吸水紙上拍干，去除殘留液滴。

注意：洗滌步驟很關(guān)鍵。不充分的洗板，會導(dǎo)致不精確或錯誤上升的吸光度值。

5.除空白對照孔（A1）外，加50µL基孔肯雅熱液抗原液至各孔，蓋板
6.室溫下溫育30分鐘
7.重復(fù)步驟4
8.除空白對照孔（A1）外，加50µL 基孔肯雅熱液抗體液至各孔，蓋板
9.室溫下溫育30分鐘
10.重復(fù)步驟4
11.除空白對照孔（A1）外，各加50 µL鏈酶親和素酶聯(lián)物至各孔，蓋板
12.室溫下溫育30分鐘
13.重復(fù)步驟4
14.加100 µL TMB底物液至各孔中
15.黑暗處，精確溫育15分鐘
16.按加TMB底物液的順序和速度，加100 µL終止液至各孔中。藍(lán)色溶液在孵育過程中變?yōu)辄S色。

注意：強陽性樣品會導(dǎo)致色原產(chǎn)生沉淀，沉淀的產(chǎn)生會對讀數(shù)產(chǎn)生影響。所以先用陰性基質(zhì)進行預(yù)稀釋，建議1：1的比例稀釋，然后，再1個單位的預(yù)稀釋樣品+100個單位的樣品稀釋液。終結(jié)果（以U計算）乘以預(yù)稀釋因子2即可

17.加入終止液后，30分鐘內(nèi)，在酶標(biāo)儀450/620 nm處讀數(shù)

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