蜜臀无码,AⅤ一二三四区,人妻熟妇AV,丁香少妇尿尿婷婷看丁香尿尿

人胎球蛋白A檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
德國DRG*，貨號：EIA4522
德國DRG中國*代理商“深圳科潤達生物工程有限公司”竭誠為您服務

 
預期用途
此試劑盒可用于血清，血漿，細胞上清，組織提取物和尿液中人胎球蛋白A也稱之為α-2-HS糖蛋白的定量的檢測；血清或血漿中胎球蛋白A的檢測可作為某些癌癥及基因遺傳缺陷的血清蛋白診斷的輔助工具；此試劑盒僅供實驗室專業(yè)人士使用
 
簡介
胎球蛋白A也稱之為α-2-HS糖蛋白，是由兩個氨基末端抑制域和一個較小的羧基末端域組成的59 kDa 分子量的糖蛋白；由肝臟合成，分泌至血流，成年哺乳動物體內(nèi)的濃度范圍在0.5-1.0g/L；嬰兒期的血清胎球蛋白A含量高，參與蛋白酶抑制活性，與鈣代謝和骨生成調(diào)節(jié)相關；累積于骨和牙齒內(nèi)，作為生物學上非膠原骨蛋白的主要部分，研究表明，胎球蛋白A是循環(huán)中主要的鈣化抑制劑；干涉鈣鹽沉淀；近期研究顯示低水平胎球蛋白A的慢性腎臟衰竭患者與心血管病的高死亡率顯著相關；另一方面，糖尿病老年人血清胎球蛋白A含量比正常人高，這是獨立于胰島素抑制劑的其他標記物；另外，高胎球蛋白A水平還可作為心血管疾病的的危險標記物
 
實驗原理
此試劑盒可用于血清樣本中人胎球蛋白A的定量檢測；采用雙位點夾心法，羊抗人胎球蛋白A多抗結(jié)合人胎球蛋白A的不同位點
將含人胎球蛋白A的試驗標準品，質(zhì)控品和預稀釋樣本加至包被了高度親和羊抗人胎球蛋白A多抗的微孔內(nèi)，*次孵育，包被抗體捕獲樣本中的人胎球蛋白A，未結(jié)合的蛋白洗板除去，然后加入HRP標記的抗人胎球蛋白A酶聯(lián)物加入至每孔，“夾心-人胎球蛋白A-HRP-標記的酶聯(lián)物”形成夾心，未結(jié)合的示蹤抗體通過洗板除去，結(jié)合于包被板上的HRP酶免物與底物液定時反應，然后在酶標儀上檢測；結(jié)合于包被胎球蛋白A上示蹤抗體酶活性與樣本中胎球蛋白A的含量直接相關，在點對點或三次回歸模式下以標準品的濃度比上OD值繪制標準曲線，樣本中的胎球蛋白A可直接從標準曲線上得到
 
試劑：準備與貯存
此試劑盒收到后立即貯存于2-8℃下，效期見試劑盒標簽；所有成分在2-8℃下可保存至有效期
使用前，所有試劑平衡至室溫，不同批次的試劑不能交換使用
 

1. 包被板，96孔，包被了抗人胎球蛋白A抗體；微孔板固定于板架上，密封于含有干燥劑的鋁箔密封袋內(nèi)；貯存于2-8℃至有效期
2. 胎球蛋白A示蹤抗體，1瓶，0.6 ml，濃縮，HRP標記的抗人胎球蛋白A示蹤抗體溶于穩(wěn)定的蛋白基質(zhì)中；此試劑使用前需用示蹤劑抗體稀釋液進行稀釋；貯存于2-8℃至有效期
3. 示蹤抗體稀釋液，1瓶，11ml，即用，Trizma鹽酸溶于緩沖液；根據(jù)實驗步驟用于示蹤抗體稀釋；貯存于2-8℃至有效期
4. 試驗緩沖液，濃縮，1瓶，11ml，含牛血清白蛋白的磷酸緩沖鹽；建議使用前以1:10比例用雙蒸水稀釋（如11 ml濃縮+99 ml的雙蒸水）；貯存于2-8℃至有效期
5. 洗滌液，濃縮，1瓶，20ml，30倍濃縮；試驗前需用580ml的雙蒸水稀釋，混勻；一旦稀釋，不含疊氮化物防腐劑的磷酸緩沖鹽洗滌液會含表面活性劑；稀釋的洗滌液在室溫下可保存至效期
6. HRP底物液；1瓶，12ml，含過氧化氫的TMB底物液；貯存于2-8℃至有效期
7. 終止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸，貯存于2-8℃至有效期
8. 胎球蛋白A標準品，5瓶，含胎球蛋白A，不含疊氮化物防腐劑的液態(tài)牛血清基質(zhì)；各標準品濃度見瓶子標簽；3次凍存周期使用后，所有標準品保存至-20℃或更低
9. 胎球蛋白A質(zhì)控，2瓶，含人胎球蛋白A，不含疊氮化物防腐劑的液態(tài)牛血清基質(zhì)，各質(zhì)控的濃度范圍見瓶子標簽，3次凍存周期使用后質(zhì)控保存至-20℃或更低

 
安全注意事項
 

1. 此試劑用于臨床參考實驗室，僅供醫(yī)生或?qū)嶒炇覍I(yè)人士體外診斷用
2. 若試劑是有潛在感染風險的，試驗操作和處理時應戴手套
3. 避免接觸含TMB，過氧化氫，硫酸的試劑，TM,B會刺激皮膚和粘膜，導致皮膚過敏反應；TMB還可能是致癌物質(zhì)；皮膚接觸到硫酸會導致嚴重灼傷，不要接觸到眼睛，皮膚，衣服，不要吸入煙霧，一旦接觸，應立即用大量水沖洗至少15min
4. 良好實驗室操作規(guī)范

 
實驗所需材料但試劑盒未提供
 

1. 的單通道移液器，10-25-100-1000ul
2. 適于100 ul的可重復用分液器
3. 適于所有體積的一次性槍頭
4. 一次性玻璃管或塑料管12x75mm或13x100mm
5. 帶蓋的一次性塑料瓶；100-1000ml
6. 鋁箔紙
7. 雙蒸水或去離子水
8. 塑料蓋板或聚乙烯薄膜
9. 多通道洗滌瓶或全自動（半自動）洗板系統(tǒng)
10. 酶標儀，450nm

 
樣本采集
人胎球蛋白A的檢測所需血清或血漿樣本量僅10 ul
個人在采樣前無需特殊準備，全血采集，室溫下立即凝集30min，然后離心分離出血清（850-1500 xg 10min）。全血采集3小時內(nèi)需將血清從凝集中分離出來，轉(zhuǎn)移至另一干凈試管；血清樣本可保存在-20℃或更低，避免超過三次的凍融
建議采用24小時尿液來檢測尿液中的胎球蛋白A；采集第二天早晨的尿液，排除采樣前剛進行劇烈運動的，因腎功能不全導致多尿的；由利尿藥引起的人體內(nèi)尿蛋白含量波動降低，可能與尿肌酸酐濃度相關；
細胞上清，組織提取物則需進行試驗樣本的倍比稀釋；多個平行樣檢測得到更的試驗結(jié)果
 
實驗步驟
患者樣本的準備
患者血清或血漿樣本在檢測前需用試驗緩沖液進行1:10000 的稀釋
 

1. 以1A和1B 標記兩個試管（12x75 mm）
2. 加1ml的試驗緩沖液至各試管（1A和1B）
3. 加10 ul的患者血清至1A試管，混合（1:100）
4. 從1A管內(nèi)吸取10ul已稀釋的樣本至1B試管，混合（1:10000）

注意：建議采用/經(jīng)校準的移液器，稀釋過程小心操作，得到更的結(jié)果；建議采用多通道（Combitip）12.5ml的Eppendorf可重復移液器加1ml的試驗緩沖液，而不用50ml的槍頭
 
患者尿液樣本的實驗前用試驗緩沖液1:100的稀釋
 

1. 以1標記一試管（12x75 mm）
2. 各管加1ml試驗緩沖液
3. 加10ul患者尿液樣本至1管，混合（1:100）

注意：若所得結(jié)果中樣本濃度高于5個標準品中的zui高標準品濃度，則尿液樣本需進一步稀釋（如1:500），然后重新檢測
 
試劑準備
 

1. 試驗前將所有試劑平衡至室溫，不同批次的試劑不能混合使用
2. 使用前，試驗緩沖液（濃縮）及洗滌液（濃縮）需進行稀釋，配制成工作液；詳情請見“試劑”部分

 
試驗操作
 

1. 將實驗所需板條固定于板架上，標準品，質(zhì)控品及未知樣本做雙孔檢測
2. 試驗布局

ROW	STRIP 1	STRIP 2	STRIP 3
A	STD 1	STD 5	SAMPLE 2
B	STD 1	STD 5	SAMPLE 2
C	STD 2	C 1	SAMPLE 3
D	STD 2	C 1	SAMPLE 3
E	STD 3	C 2
F	STD 3	C 2
G	STD 4	SAMPLE 1
H	STD 4	SAMPLE 1

1. 加25 ul的標準品，質(zhì)控品及預稀釋的1:10000樣本至相應孔內(nèi)；注意：尿液樣本是1:100的稀釋
2. 每孔加100 ul的試驗緩沖液
3. 混勻，蓋板，避免暴露于陽光下
4. 室溫下孵育2小時
5. 示蹤抗體工作液的準備，示蹤抗體1:21的用示蹤抗體稀釋液稀釋；每條板需1ml的示蹤抗體稀釋液+50 ul的胎球蛋白A示蹤抗體
6. 移去蓋板，棄去孔內(nèi)反應液，每孔加350ul的洗滌工作液洗板5次，然后*吸出孔內(nèi)液體，或可采用全自動洗板機
7. 以上稀釋的示蹤抗體工作液加100 ul至各孔
8. 蓋板，避免暴露于陽光下
9. 室溫下孵育30min
10. 移去蓋板，棄去孔內(nèi)反應液，每孔加350ul的洗滌工作液洗板5次，然后*吸出孔內(nèi)液體，或可采用全自動洗板機
11. 每孔加100 ul的ELISA HRP 底物液
12. 蓋板，避免暴露于陽光下
13. 室溫下孵育20min
14. 移去蓋板，每孔加100 ul的終止液，混勻
15. 10min 內(nèi)在450nm酶標儀上檢測吸收值

注意：為降低背景色，可以雙波長檢測，設置參考波長：595nm 或620 nm 或630nm
 
操作注意事項
 

1. 建議所有標準品，質(zhì)控品和未知樣本做雙孔檢測；各雙孔檢測的吸收均值用于數(shù)據(jù)處理，結(jié)果計算
2. 將光敏試劑保持裝于原琥珀色瓶內(nèi)
3. 將剩余的包被板條放存在含干燥劑的密封袋內(nèi)，避免受潮
4. 操作嚴格，移液器經(jīng)校準可確保試驗的可重復性
5. 孵育時間或溫度也可能會影響試驗結(jié)果
6. 避免微孔內(nèi)產(chǎn)生氣泡，可能會導致結(jié)合率低，雙孔讀數(shù)變異系數(shù)高
7. 使用前所有試劑都應*混勻，避免產(chǎn)生氣泡

 
結(jié)果說明
 

1. 計算各雙孔吸收值均值
2. 所有的吸收均值都減去標準品1（即0ng/ml）的吸收均值
3. 在點對點或?qū)?shù)-對數(shù)坐標紙上以標準品的濃度為X軸，吸收均值為Y軸繪制標準曲線；或是采用數(shù)據(jù)處理軟件進行結(jié)果計算

質(zhì)控品和樣本濃度（1:10000）可直接從標準曲線上讀取，若采用的是對數(shù)-對數(shù)或數(shù)據(jù)處理軟件計算則需用到對數(shù)轉(zhuǎn)換；樣本校正吸收值在濃度1ng/ml 和下一個zui高標準品間的需通過公式計算：

未知樣本濃度=	未知樣本吸收值	x   2nd 標準品濃度值
	2nd 標準品吸光值

 
典型標準曲線
以下為典型示例的吸收值及標準曲線；此標準曲線不能用于其他實驗的計算


期望值
70例正常成人血清檢測人胎球蛋白A ，95%百分比的正常值范圍在0.35-0.95 g/L，均值為0.57 g/L ;標準偏差為0.13 g/L
10000倍的稀釋因子應考慮到樣本濃度的zui終計算
如：從標準曲線上直接得到的10000倍稀釋樣本值是24.3 ng/mL,那原樣本濃度為
24.3 ng/mL x 10,000 = 243000 ng/mL = 0.243 g/L
 
操作局限性
 

1. 人胎球蛋白A直接檢測的zui低濃度為5.0 ng/ml（試驗分析靈敏度），10000倍稀釋的樣本血清回算后，原血清樣本濃度的zui低檢測限是50 ug/ml
2. 因人胎球蛋白A檢測無金標準，所以試驗標準通過稀釋含蛋白基質(zhì)的高度純化重組人胎球蛋白A建立
3. 可直接讀取的未知樣本濃度高于350 ng/ml，建議對樣本進一步稀釋
4. 若實驗室酶標儀在450nm處的OD值不能超過2.0，建議將標準品6 舍去，不做檢測
5. 細菌或真菌污染的樣本或試劑，或試劑間的交叉污染都可能會導致錯誤結(jié)果
6. 聚酯樹脂處理的去離子水不能激活過氧化氫酶

 
質(zhì)量控制
適當?shù)囊阎デ虻鞍譇水平的質(zhì)控可確保試驗結(jié)果的有效性；建議所有實驗室除了試劑盒本身的質(zhì)控外，還應額外建立自己實驗室的胎球蛋白A質(zhì)控
 
性能指標
 

1. 靈敏度

人胎球蛋白A分析靈敏度，零標準品20次重復試驗，95%置信區(qū)間，zui后得5.0 ng/ml
 
 

1. 線性

兩個人的血清樣本進行稀釋檢測，結(jié)果如下，ng/ml

#	稀釋比例	檢測值	期望值	回收率%
1	1:10,000	21.9
	1:20,000	11.9	11.0	108
	1:40,000	5.3	5.5	96
	1:80,000	2.9	2.7	107
	1:160,000	1.6	1.4	114
2	1:10,000	192
	1:20,000	99.9	96	104
	1:40,000	45.2	48	94
	1:80,000	22.2	24	93
	1:160,000	13.4	12	112

 
 

1. 精密度

兩個樣本在一個試驗中做20次重復檢測，分析板內(nèi)差異

胎球蛋白A均值（ng/mL）	CV （%）
33.6	5.5
121.1	4.8

 
兩個樣本雙孔檢測，做了12次檢測，分析板間差異

胎球蛋白A均值（ng/mL）	CV （%）
32.4	6.8
123.7	5.7

 
4. 回收率
兩位患者血清加不同量的人胎球蛋白A ，檢測，結(jié)果如下，ng/ml

#	原始值	加入的量	檢測值	期望值	回收率%
1	33.6	21	25.1	27.3	92
		63	44.4	48.3	92
		200	120.1	116.8	103
2	121.1	21	68.9	71.1	97
		63	88.6	92.1	96
		200	157.1	160.6	98

 
 
 
 
 
本譯文僅供參考，請以原說明書為準
中國*總代理：深圳市科潤達生物工程有限公司
辦公地址：深圳市南山區(qū)蛇口沿山路45號佳利泰大廈7D。
研發(fā)地址：深圳市南山區(qū)蛇口沿山路10號6樓
：（8線）傳真：+86 755 26814431
免費訂貨：。
技術咨詢：，；手機，；
：518067    ：kerunda@szonline.net。
*：www.kerunda.com.cn
歡迎索取詳細資料，在線：kerunda_tech