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公司名稱：深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司
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首頁(yè) > 技術(shù)文章 > CYFRA 21-1（化學(xué)發(fā)光法）ELISA試劑盒

CYFRA 21-1（化學(xué)發(fā)光法）ELISA試劑盒

CYFRA 21-1（化學(xué)發(fā)光法）ELISA試劑盒

德國(guó)DRG*，貨號(hào)：CLA-4731

德國(guó)DRG中國(guó)*代理商“深圳科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司”竭誠(chéng)為您服務(wù)

預(yù)期用途

此試劑盒基于化學(xué)發(fā)光免疫原理，用于血清和肝素血漿中CYFRA 21-1的檢測(cè)，此試劑盒僅用于研究

說(shuō)明

此試劑盒采用兩種鼠單抗KS19.1和BM19.21來(lái)檢測(cè)細(xì)胞角蛋白19片段

實(shí)驗(yàn)原理

此試劑盒采用的是化學(xué)發(fā)光免疫法，基于夾心原理

包被板上包被有能結(jié)合CYFRA 21-1分子上*抗原位點(diǎn)的單克隆小鼠抗體，含有內(nèi)源性CYFRA 21-1的樣品與HRP標(biāo)記的抗CYFRA 21-1抗體酶聯(lián)物共同孵育，洗去未結(jié)合的酶聯(lián)物，樣品中CYFRA 21-1的濃度與結(jié)合的酶聯(lián)物的量成正比，加入底物液之后，樣品中的CYFRA 21-1濃度與顏色強(qiáng)度成正比

注意事項(xiàng)及預(yù)防措施

1. 試劑僅供專業(yè)人士使用

2. 試劑盒中的所有試劑包括檢測(cè)過的人血清/血漿對(duì)HIV/II，HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性，所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理

3. 開始試驗(yàn)前，請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書，確定所有的事項(xiàng)都已明白

4. 微孔板是可拆的，不用的板條應(yīng)固定在板架上，裝在密封袋內(nèi)保存于2-8℃

5. 加樣時(shí)應(yīng)按相同的順序快速加樣

6. 不同的試劑裝在不同的試劑瓶?jī)?nèi)，不能混用，如果用事先裝了酶聯(lián)物的瓶子再裝底物液，則顏色會(huì)發(fā)生變化。不要將剩余的試劑倒回原裝瓶?jī)?nèi)，以免污染

7. 充分混勻孔內(nèi)成分，以達(dá)到很好的試驗(yàn)結(jié)果。微孔板不可重復(fù)使用

8. 試驗(yàn)過程中，不要讓孔內(nèi)出現(xiàn)干燥情況，洗板步驟過后應(yīng)立即加樣

9. 試驗(yàn)開始前，所有試劑平衡至室溫，溫度會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有影響

10. 不要用嘴吸取樣品，避免皮膚接觸到試劑和樣品

11. 實(shí)驗(yàn)區(qū)內(nèi)禁止飲食或化妝

12. 處理試劑和樣品時(shí)應(yīng)戴一次性手套。微生物污染可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果失敗

13. 按照相應(yīng)的國(guó)家生物安全管理?xiàng)l理進(jìn)行操作

14. 不要使用過期的試劑

15. 所有試劑的量都應(yīng)按說(shuō)明來(lái)，使用校正的移液器和發(fā)光儀可得到*的結(jié)果

16. 發(fā)光底物液對(duì)光敏感，應(yīng)避免陽(yáng)光直射，保存于黑暗處

17. 不要混合使用不同批次的試劑，板條。試劑盒的運(yùn)輸和貯存環(huán)境不同可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果有微小的區(qū)別

18. 有些試劑內(nèi)含有Proclin300，BND和MIT作為防腐劑，萬(wàn)一眼睛或皮膚接觸到了應(yīng)立即用水沖洗

19. 按照相應(yīng)的國(guó)家生物安全管理?xiàng)l理*的方法處理樣品和試劑

20. 有害物質(zhì)的相關(guān)信息請(qǐng)參考MSDS，產(chǎn)品的MSDS可直接向DRG索取

試劑盒組成

1. 微孔板，12x8, 96孔，可拆，包被有抗CYFRA 21-1抗體（單克?。?/div>

2. 標(biāo)準(zhǔn)品，0-4,5支，凍干粉，1.0ml，濃度為：0；3；10；25；50ng/ml 含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

3. 質(zhì)控，1支，1.0ml，質(zhì)控值和范圍請(qǐng)見QC質(zhì)控單含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

4. 樣品稀釋液，1支，3ml，即用，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

5. 酶聯(lián)物，21X，1支，0.5ml，HRP標(biāo)記的抗CYFRA 21-1抗體，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

6. 酶聯(lián)物稀釋液，1支，7ml，即用，含0.03%的Proclin300，BND和0.01%的MIT作防腐劑

7. 底物液

試劑A，1支，2.0ml，注意：光敏感

試劑B，1支，2.0ml，注意：光敏感

試劑C，1支，5.0ml

8. 洗滌液，1支，30ml，40X

實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒未提供

1. 發(fā)光光度計(jì)

2. 校正的移液器

3. 吸水紙

4. 去離子水或雙蒸水

5. 計(jì)時(shí)器

6. 半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙或數(shù)據(jù)處理軟件

貯存條件

未開封的試劑在2-8℃下可保存至有效期，不要使用過期的試劑

打開的試劑必要保存在 2-8℃，微孔板也保存于2-8℃，一旦打開了微孔板的袋子，需小心地將其重新密封

注意：配制標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品在 2-8℃下可保存至少4周，在-20℃下可保存更長(zhǎng)時(shí)間

試劑準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)前將所有試劑平衡至室溫

標(biāo)準(zhǔn)品

向標(biāo)準(zhǔn)品瓶?jī)?nèi)加1ml去離子水配制

2-8℃下可保存至少4周，在-20℃下可保存更長(zhǎng)時(shí)間

質(zhì)控品

向質(zhì)控品瓶?jī)?nèi)加1ml去離子水，放置10min，使用前反復(fù)混勻

2-8℃下可保存至少4周，在-20℃下可保存更長(zhǎng)時(shí)間

洗滌液

加去離子水稀釋40X的濃縮洗滌液

30ml的濃縮洗滌液+1170ml的去離子水，即得1200ml的工作洗滌液

室溫下可保存2周

酶聯(lián)物

用酶聯(lián)稀釋液以1:21的比例稀釋

配制的酶聯(lián)物24小時(shí)內(nèi)使用

例如：如果板條全部使用，吸取300ul的濃縮酶聯(lián)物，加上6ml的酶聯(lián)物稀釋液，即得

如果板條不全使用，吸取25ul的濃縮酶聯(lián)物，加上0.5ml的酶聯(lián)物稀釋液，即得

相關(guān)酶聯(lián)物制備見下表

板條數(shù)	酶聯(lián)濃縮物（ul）	酶聯(lián)稀釋液（ml）
1	25	0.5
2	50	1.0
3	75	1.5
4	100	2.0
5	125	2.5
6	150	3.0
7	175	3.5
8	200	4.0
9	225	4.5
10	250	5.0
11	275	5.5
12	300	6.0

化學(xué)發(fā)光底物液

試劑A和試劑B混合，然后以1:2的稀釋比例用試劑C稀釋，即得即用的底物液

現(xiàn)配現(xiàn)用，只能保存1小時(shí)

如果所有板條都使用，則試劑A和試劑B各1.5ml混合+3ml的試劑C

樣品采集和準(zhǔn)備

試驗(yàn)可采用血清和肝素血漿

檸檬酸鹽血漿值減小，EDTA血漿值增高

不要使用溶血，黃疸或脂血的樣品

注意：不要使用含有疊氮化物的樣品

樣品采集

血清

靜脈穿刺采血，允許凝集，室溫下離心分離出血清。未*凝固時(shí)不可進(jìn)行離心。接受了抗凝劑治療的捐獻(xiàn)者的血液凝集時(shí)間更長(zhǎng)

血漿

將全血收集到含有抗凝劑的離心管內(nèi)，采集后立即離心

樣品貯存和準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)前，將樣品蓋上蓋子，貯存于2-8℃，可保存2天，想保存更長(zhǎng)時(shí)間則需凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融

樣品稀釋

在zui初的試驗(yàn)中，如果樣品濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品濃度，則應(yīng)用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋

結(jié)果計(jì)算時(shí)應(yīng)乘以稀釋因子

例如：

A）1:10稀釋 10ul血清+90ul樣品稀釋液（充分混勻）

B）1:100稀釋 10ul稀釋液A）1:10+90ul樣品稀釋液（充分混勻）

實(shí)驗(yàn)操作

操作注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)前將所有試劑平衡至室溫，混勻，不產(chǎn)生氣泡

2. 實(shí)驗(yàn)一旦開始，所有步驟必須完整的進(jìn)行下去

3. 避免污染試劑，槍頭和微孔/管。每個(gè)微孔的加樣都應(yīng)該用新的槍頭，避免交叉污染

4. 實(shí)驗(yàn)前將所有試劑準(zhǔn)備好，蓋子打開，所需板條固定等，這樣可以確保每個(gè)步驟間隔時(shí)間一致，無(wú)中斷。

5. 酶免反應(yīng)中時(shí)間和溫度成線性關(guān)系

實(shí)驗(yàn)步驟

每次檢測(cè)都應(yīng)建立一標(biāo)準(zhǔn)曲線

1. 將實(shí)驗(yàn)所需板條固定于板架上

2. 加50ul的標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品于相應(yīng)的孔內(nèi)

3. 每孔加50ul現(xiàn)配的酶聯(lián)物，充分混勻10秒，充分混勻這一步很重要

4. 室溫下孵育30min（無(wú)需蓋板）

5. 棄去孔內(nèi)廢液，每孔300ul的洗滌液洗板3次，吸水紙上拍干

重要提醒：洗板過程直接會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)的靈敏度和度

6. 每孔加50ul現(xiàn)配的底物液

7. 室溫下孵育10min

8. 加入底物液20min內(nèi)在發(fā)光光度計(jì)上讀數(shù)

結(jié)果計(jì)算

1. 計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和樣品的RLU平均值

2. 在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上，以標(biāo)準(zhǔn)品的RLU的均值為Y軸，濃度為X軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

3. 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上通過RLU均值找到相對(duì)應(yīng)的濃度值

4. 全自動(dòng)法：自動(dòng)法用zui合適的4參數(shù)對(duì)數(shù)擬合法計(jì)算，它是計(jì)算方法，其他方法得出的結(jié)果可能會(huì)有細(xì)微的區(qū)別

5. 樣品濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取，樣品濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品濃度的則需進(jìn)一步稀釋，或記錄為＞50ng/ml。結(jié)果計(jì)算時(shí)要乘以稀釋因子

使用局限性

試驗(yàn)中嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作和良好的實(shí)驗(yàn)操作習(xí)慣可得到*試驗(yàn)結(jié)果

任何不恰當(dāng)?shù)奶幚砘蛟囼?yàn)步驟的改動(dòng)都會(huì)對(duì)結(jié)果造成影響

干擾底物

以下物質(zhì)低于下面所述濃度，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果都會(huì)不明顯

血紅蛋白	4mg/ml
膽紅素	0.5mg/ml
甘油三酯	7.5mg/ml

試驗(yàn)中含有減低HAMA和嗜異性抗體干擾作用的試劑，然而，高滴定量的HAMA和嗜異性抗體可能會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾

藥物干擾

目前為止還沒有一種藥物對(duì)CYFRA 21-1檢測(cè)會(huì)產(chǎn)生影響

本譯文僅供參考，詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)

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