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公司名稱：深圳市科潤達(dá)生物工程有限公司
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萊姆氏螺旋菌IgG ELISA試劑盒

萊姆氏螺旋菌IgG ELISA檢測試劑盒說明書

（德國IBL進(jìn)口原裝：RE57201）

德國IBL中國*代理商“深圳科潤達(dá)生物工程有限公司”竭誠為您服務(wù)

1、用途: 本試劑盒用于定性/定量檢測血清或血漿中抗萊姆氏IgG抗體, 可以檢測所有萊姆氏螺旋菌亞型的感染

2、簡介: 萊姆病是一種蟬傳螺旋體感染性疾病。萊姆病的病原體為萊姆病螺旋體，能引起人類慢性游走性紅斑，以及心臟、神經(jīng)和關(guān)節(jié)等多系統(tǒng)受累的疾病，對(duì)人群健康危害較嚴(yán)重。萊姆病的實(shí)驗(yàn)室診斷方法主要是血清學(xué)方法。本試劑盒采用特異性萊姆氏螺旋菌三個(gè)亞型的混合抗原進(jìn)行微孔板包被,具有較高的檢測靈敏度和特異性。

3、檢測原理：采用夾心ELISA方法，將萊姆氏螺旋菌抗原包被于微孔板底部，檢測時(shí)，稀釋樣本及試劑盒質(zhì)控品加入微孔板，樣本中的抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體與抗原結(jié)合，經(jīng)過孵育，洗滌，加入HRP標(biāo)記的抗人IgG二抗，在經(jīng)過孵育，洗滌后加入HRP酶的底物顯色劑TMB，終止顯色，酶標(biāo)儀讀板，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或者Cutoff值判斷樣本的陰陽性。

4、注意事項(xiàng)和預(yù)防措施

1）此試劑盒僅用于體外診斷和專業(yè)人士使用。

2）在檢測開始之前，仔細(xì)和完整的閱讀說明書，使用試劑盒提供的包裝插件的有效版本，確保所有的程序都清楚。

3）如果試劑盒有破壞的請(qǐng)與IBL公司或是提交你的申請(qǐng)，但自您拿到試劑盒后zui遲不超過一個(gè)星期。檢測時(shí)請(qǐng)不要使用已被損害的試劑，以確保自身安全。

4）按照批號(hào)和有效期，不混合使用不同批號(hào)的試劑，也不要使用過期的試劑。

5）遵守好的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)則和安全指南。穿實(shí)驗(yàn)服，帶橡皮手套，有必要時(shí)請(qǐng)戴護(hù)目鏡。

6）此試劑盒中含有會(huì)傷害眼睛和皮膚的有害試劑。請(qǐng)閱讀材料來源和標(biāo)簽獲取詳細(xì)信息。產(chǎn)品的材料安全數(shù)據(jù)單能夠從IBL公司主頁上下載，也可直接咨詢IBL公司獲取。

7）根據(jù)國家生物有害物質(zhì)及安全條例，所有化學(xué)藥品和準(zhǔn)備或使用過的試劑都應(yīng)當(dāng)做有害物質(zhì)進(jìn)行處理。

8）避免接觸終止液，以免刺激或著燒皮膚。

9）試劑盒中的所有試劑（包括檢測過的人血清/血漿）對(duì)HIV/II,HbsAg和HCV都表現(xiàn)為陰性,但是試劑中會(huì)出現(xiàn)此類病毒（HIV/II,HbsAg和HCV）或其他具有感染性的病原體的可能性都不能*被排除.因此,所有的試劑在使用和處理的過程中都應(yīng)當(dāng)作潛在生物有害物質(zhì)進(jìn)行處理

5、貯存與穩(wěn)定性

試劑盒和運(yùn)輸環(huán)境和儲(chǔ)存環(huán)境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。開封的包被板條在三個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定，前提是將包被板條用袋子密封并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。

6、樣品的采集與貯存

血清/血漿（EDTA抗凝）

按照一般原則進(jìn)行靜脈采血。自樣品采集到檢測都應(yīng)保持血液樣品的完整性。不要使用易容血、黃疸血和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，實(shí)驗(yàn)前應(yīng)將其離心以除去顆粒物質(zhì)。
貯存	2-8℃	≤-20℃（分裝凍存）	避免高溫和太陽直射，避免反復(fù)凍融。
穩(wěn)定性	5天	12個(gè)月	避免高溫和太陽直射，避免反復(fù)凍融。

7、試劑盒組份

1×12×8	MTP	包被板，可拆，微孔中包被了特異性抗原。
1×12mL	ENZCONJ	酶聯(lián)結(jié)合物，綠色，即用性，HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體
4×1.5mL	CONTROL A-D	A-D標(biāo)準(zhǔn)品: 含量為: 2; 10; 50; 200 U/mL，其中標(biāo)準(zhǔn)品B作為Cutoff標(biāo)準(zhǔn)品,內(nèi)含人抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體，穩(wěn)定劑
1.5mL	CONTROL+	陽性質(zhì)控，即用，內(nèi)含人抗萊姆氏螺旋菌IgG抗體，穩(wěn)定劑
1.5mL	CONTROL-	陰性質(zhì)控，即用，內(nèi)含人血清和穩(wěn)定劑。
1×100mL	DILBUF	稀釋用緩沖液，藍(lán)色，內(nèi)含磷酸緩沖液、去垢劑、BSA和穩(wěn)定劑
1×100mL	WASHBUF	洗滌液（10×），內(nèi)含磷酸緩沖液、去垢劑和穩(wěn)定劑。
1×12mL	TMB SUBS	TMB底物液，即用，內(nèi)含TMB。
1×12mL	TMB STOP	TMB終止液，即用，含1M H₂SO₄

8、實(shí)驗(yàn)所需器材（但試劑盒不提供）

1）移液器（Eppendorf移液器或類似儀器,CV＜3%），體積為5μL；100μL；1000μL

2）漩渦混勻器

3） 37℃孵箱

4）樣品稀釋用試管（1mL）

5）帶有儲(chǔ)器的8道移液器。

6）洗滌瓶，自動(dòng)或半自動(dòng)的包被板洗滌設(shè)備。

7）可在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀（參考波長：600-650nm）

8）雙蒸水或去離子水

9）坐標(biāo)紙，取樣吸頭，記時(shí)器。

9、實(shí)驗(yàn)操作及注意事項(xiàng)

1）樣品處理不合理或?qū)?shí)驗(yàn)操作進(jìn)行任何改動(dòng)動(dòng)都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。取樣體積、溫育時(shí)間、欲處理步驟都必須嚴(yán)格按說明進(jìn)行。只能使用標(biāo)準(zhǔn)移液器和標(biāo)準(zhǔn)設(shè)備。

2）一旦實(shí)驗(yàn)開始，所有的步驟都必須完整的進(jìn)行下去，不允許中斷。把所有試劑和樣品都拿到18-25℃的實(shí)驗(yàn)室中，在使用前，輕輕搖動(dòng)液體試劑和樣本，試劑混合過程中要避免氣泡。

3）請(qǐng)勿接觸試劑、移液器、微孔/試管。加試劑和樣本時(shí)，請(qǐng)使用新的取樣吸頭，以避免交叉污染。不用的試劑應(yīng)用蓋子蓋好，以免重復(fù)使用。

4）用定標(biāo)儀對(duì)反應(yīng)板進(jìn)行校準(zhǔn)。

5）溫育時(shí)間會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。微孔加樣的順序和時(shí)間都必須一致。建議使用8道移液器加樣。

6）包被板的清洗非常重要，微孔清洗不好將會(huì)形成錯(cuò)誤的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議使用多道移液器或自動(dòng)微孔清洗設(shè)備進(jìn)行清洗。每次溫育間隔期間避免微孔干燥。加洗滌液和吸液時(shí)要避免碰到包被孔。清洗和加試劑時(shí)都應(yīng)特別小心。清洗時(shí)，在微孔中的加入洗滌液緩沖液，同時(shí)確保無微孔中無殘?jiān)?/div>

7）濕度會(huì)影響包被板，所以在未到達(dá)室溫時(shí)請(qǐng)勿打開包裝，未使用的包被板要重新密封于裝有干燥劑的包裝袋中。

8）此實(shí)驗(yàn)也可以在自動(dòng)操作系統(tǒng)上進(jìn)行，具體信息請(qǐng)見“性能”。

10、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明

10.1成分的準(zhǔn)備

稀釋/溶解	成分		稀釋液	比例	備注	貯存	有效期
100mL	洗滌液	1000mL	雙蒸水	1：10	有必要的話,加熱至18-25℃以溶解所有結(jié)晶	2-8℃	2-3月

10.2樣本稀釋

10.2.1 血清/血漿樣本

樣本	稀釋	試劑	比例	備注
血清/血漿	按一般規(guī)則稀釋	稀釋緩沖液	1:101	10 μL樣品 + 1 mL 稀釋緩沖液

樣品中IgG濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品含量的樣品必須進(jìn)一步稀釋，并重復(fù)檢測。

10.2.2 腦脊液樣本:按照Reiber法進(jìn)行腦脊液檢測時(shí),有必要用使血清和腦脊液具有相同的濃度或相同的Cutoff判別范圍（OD值為1-0.1）,通過下面方式稀釋可以實(shí)現(xiàn):

樣本	稀釋	試劑	比例	備注
血清/血漿	按一般規(guī)則稀釋	稀釋緩沖液	1:401	5μL樣品 + 2 mL 稀釋緩沖液
腦脊液	按一般規(guī)則稀釋	稀釋緩沖液	1:4	50μL樣品 + 150μL 稀釋緩沖液

Cutoff值可以通過1:101稀釋參數(shù)來校正,1:401稀釋血清Cutoff值,稀釋度乘以4。1:4稀釋的腦脊液Cutoff值，稀釋度除以25。

如果檢測樣本的OD值在1.0和0.1之外，則應(yīng)通過下列稀釋后，再檢測

血清/血漿	1：100	1：200	1：400	1：800	1：1600
腦脊液	1：2	1：4	1：8	1：16	1：32

11、實(shí)驗(yàn)步驟

1）將標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、稀釋樣本分別100μL加入包被板的微孔中。定性檢測只需加入標(biāo)準(zhǔn)品B。

2）蓋板，37℃下溫育60min。

3）棄取微孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔用300ul的已稀釋好的洗滌液洗3次，在吸水紙上將板拍干。

4）在每一微孔中加入100μL的二抗酶結(jié)合物。

5）蓋板（新的粘性金屬板），37℃下溫育30分鐘。

6）棄取微孔內(nèi)反應(yīng)液，每孔用300μL的已稀釋好的洗滌液洗3次，在吸水紙上將板拍干。

7）如果可以的話，使用8道移液器加底物液和終止液。加底物液和終止液的時(shí)間間隔應(yīng)當(dāng)相同，使用自動(dòng)置換型移液器并避免氣泡產(chǎn)生。

8）每孔加100μL TMB底物液

9） 18-25℃下避光溫育30min，

10）每孔加100ulTMB終止液以終止底物反應(yīng)。加終止液后，60分鐘內(nèi)在450nm處測OD值（參比波長：600-650nm）

12、質(zhì)量控制

嚴(yán)格按照說明書操作所獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果才是有效的。使用者必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室優(yōu)化管理規(guī)定或其他的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。按照質(zhì)控單的要求，所有的標(biāo)準(zhǔn)品濃度都必須允許范圍內(nèi)。如果其標(biāo)準(zhǔn)不符合要求，則實(shí)驗(yàn)無效，必須重做。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)使用已知濃度的樣品做進(jìn)一步的有效質(zhì)控。如果實(shí)驗(yàn)背離實(shí)際結(jié)果，應(yīng)檢查以下問題：試劑有效期，貯存條件，取樣器，實(shí)驗(yàn)設(shè)備，溫育時(shí)間，清洗方法。

13、結(jié)果計(jì)算：計(jì)算結(jié)果可作定性或者定量判斷

13.1 定性判斷：標(biāo)準(zhǔn)品B的OD值可以作為判斷陰陽性結(jié)果的Cutoff值，樣本OD之在Cutoff值上下10%范圍內(nèi)，則結(jié)果位于灰區(qū)內(nèi)，判為可疑。如果高于灰區(qū)則判為陽性，低于灰區(qū)則判為陰性。

典型例子：

Cut-off=OD（標(biāo)準(zhǔn)品B，臨界標(biāo)準(zhǔn)品）=0.45

樣本OD=0.60

臨界指標(biāo)（COI）=0.60/0.45=1.33。該樣本判定為陽性

13.2定量判斷：在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動(dòng)生成的方法，以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸，濃度為X軸，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對(duì)數(shù)圖或?qū)?shù)-對(duì)數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進(jìn)行計(jì)算（樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉，應(yīng)使用更加合理的單值）。樣品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了，就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)，則應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明所述對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，并重新檢測。

典型標(biāo)準(zhǔn)曲線

例子，不能用于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算